黃熱病毒（YFV）實(shí)時(shí)熒光PCR核酸檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

【產(chǎn)品名稱(chēng)】

商品名稱(chēng)：黃熱病毒（YFV）核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR 熒光探針?lè)?

Name ：Diagnostic Kit for Yellow Fever Virus RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)

【包裝規(guī)格】48份/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測(cè)的疑似感染病人的靜脈血等標(biāo)本中黃熱病毒RNA，適用于黃熱病毒感染的輔助診斷。其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒用一對(duì)黃熱病毒特異性引物，結(jié)合一條特異性熒光探針，用一步法熒光RT-PCR技術(shù)對(duì)黃熱病毒RNA進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【試劑組成】

YFV 陽(yáng)性質(zhì)控品 50μl ×1 管

陰性質(zhì)控品 250μl ×1 管

說(shuō)明：不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。

【標(biāo)本采集】

疑似感染病人的靜脈血 2mL 至 EDTA-2Na 抗凝管。

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-70℃，但不能超過(guò) 6 個(gè)月，標(biāo)

本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

【使用方法】

檢測(cè)通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，請(qǐng)勿

選擇 ROX 參比熒光。

設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲

線出現(xiàn)整體傾斜時(shí)，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15

范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的 Value

值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照)，重新分析結(jié)果。

1.2RNA提取

推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的 RNA 提取試劑盒（離心柱提取

法），請(qǐng)按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

2. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性

對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑 YFV 反應(yīng)液 酶液

用量 20μl 1μl

3. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的 RNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μl，分別加入相應(yīng)的反

應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

5.2結(jié)果判斷

陽(yáng)性：檢測(cè)通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線；

可疑：檢測(cè)通道 35.0<Ct 值≤37，建議重復(fù)檢測(cè)，如果檢測(cè)通道仍為 35.0<Ct

值≤37，且曲線有明顯的增長(zhǎng)曲線，判定為陽(yáng)性，否則為陰性；

陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果 Ct 值>37 或無(wú) Ct 值。

8. 產(chǎn)品性能指標(biāo)

陰陽(yáng)性參考品符合率：5 份陽(yáng)性參考品符合率為 100％；10 份陰性參考品符合率

為 100％。

低檢測(cè)限：5.0×102copies/ml。

精密度：批內(nèi)、批間精密度檢測(cè) Ct 值的變異系數(shù)（CV）均小于等于 3%。

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